주사형 전현용 시료 작제법

1. 일반적 관찰 표면의 점액등을 제거한다.

① 세정 관찰 표변의 점액등을 제거한다.

1) 생리적 색염수 세척

2) 효소처리

3) 용매, 초음파 세정들을 목적으로 해서 선택 사용한다.

② 고정 투과형전현 시료 작제시에 사용한 것을 사용한다.

(예) A. 생체조직

1) 2.5 - 3.0% 글루타르알데히드 및 1 - 2% 오스뮴산 이중고정 (인산 buffer 또는 카고지 레이트 buffer)

2) 2.5 - 3.0% 글루타르알데히드 단독고정

B. 효모 (다당류를 많이 함유한다.)

2.5 - 3.0% 글루타르알데히드 → 1% 과망간산 칼륨후고정(인산buffer)

C. 세균류

1) 2.5 -3.5% 글루타르 알데히드 단고정

2) 또한 1 - 2% 오스뮴산 후고정 (인산buffer)

D. 곰팡이류, 포자를 갖고 있는 것 오스뮴산의 증기고정

③ 탈수 1)알콜

2) 아세톤

3) 아밀아세테이트를 사용한다.

④ 건조 1) 100% 알콜, 아세톤으로 탈수 후 자연건조, 또는 진공건조

2) 100% 알콜→아세테이트 → 자연건조

⑤증착 1) 요철이 많은시료 : 카본 + 이중증착

2) 요철이 적은 시료 : 금증착

기타 금, 파라디움(palladium)합금, 백금 카본, 백금 파라디움 합금도 사용가능

ⓞ 작제법의 일례(5㎟ 정도의 조직편의 경우)

고정 : 2% 글루타르알데히드 2시간 (0-4℃)

세정 (인산 buffer 로) 20분 3회 ( " )

1% 오스뮴산 (MILLONIG) 1시간 ( " )

탈수 : 50% 알콜 (또는 아세톤 )

70% " "

80% " "

90% " "

100%-Ⅰ " "

100%-Ⅱ " "

건조 : (여지위에서 자연건조) 적당

(시료내부를 관찰하는 경우는 알콜내 또는 건조후 면도칼로 절단한다.)

증착 : 카본 2분 시료의 요철 등에 따라 다양

금 1분

('72)는

① 1% 오스뮴산 고정 → 알콜 →공기건조

② 3% 글루타민알데히드 +오스뮴산 고정 → 알콜 → 공기건조

③ 4% 포르말린 + 오스뮴산 → 알콜 → 공기건조

이상의 3개를 조합한 것이 소장 융모의 관찰에 좋은 결과를 얻었다고한다.







시료

세정

고정(글루타르알데히드 오스뮴산등)

↓ ↓

탈수 (알콜, 아세톤 , 아밀아세테이드등) 동결

건조 파단면

↓ 동결 동결

증착 파단면 직접

↓ 직접관찰 관찰

관찰

건조 1. 공기중 건조법

2. 동결 건조법

3. 임계점 건조법

Ⅱ 특수한염색

1. 임계점 건조법 (Critical point dry)

미융모, 선모 등의 건조시의 변형제법

2. 동결직접 관찰법(Freeze and direct observation: 1,000배이하)

2' . 동결건조법 (Freeze dry)- 건조시 변형제법

3. 동결은 파단면 작제법 (Freeze fracture method)

3'. 수지 할단면법 (Resin cracking method)

4. 탈 수지법 (Resin removing method )

3,3',4는 각 세포의 할단면의 관찰에 사용된다.