촬영후 전자현미경 필름의 처리

Ⅰ. 현상

통상, 코피날 (FUJI:D-72)액을 갖추고, 농도를 묽게하거나 현상시간을 바꿈으로써 대부분의 재료에 대해서 사용할 수 있다. 그러나 암부와 명부의 차(contrast)가 대단히 크고, 그 사이의 밝기의 단계가 있는 것은, 마이크로파인 (초미립자용 조합제)나 D-76(미립자용)을 사용하여 비교적 soft한 네가 필름을 얻도록 노력한다. soft한 네가 필름으로부터 hard 한포지필름을 얻는 것이 용이하다.

현상액 처방

약품



D-72(g)

D-11(g

D-178(g)

메톨


3

1

_

무수아황산소다


45

75

90

하이드로퀴드


12

9

45

탄산소다


80

34


가성소다


-

-

18

Potasium

bromide


2

5

30

물을가한전량


1L

1L

1L

현상온도


20℃

20℃

20℃

농도를 묽게하는법

(a)

그대로

그대로

그대로

(원액):(물)

(원액):(물)

(b)

(c)

1:1

1:2

-

-

-

-


Ⅲ 시료의 콘트라스트

. 콘트라스트가 큰 시료에는 미크로파인

. 콘트라스트가 작은 시료에는 D-178로 70-100초

.네가 현상은 D-72 (1:1) 20℃ 4분, 인화지는 F3가 표준이다.

. D-72는 시판 조합제 콜렉톨로도 비슷한 특성을 주는 것이 가능하다.

정지 1.5% 초산 수용액에 수 분 담근다.

정착 감광성 할로겐은을 하이포(티오 황산나트륨)로 녹여가는 것이 정착처리이다.

인화지의 현상이 끝난 것은 반드시 정착액에 담그기 전에 1.%빙초산액에 현상정지를 행한다.

빠른 정착을 필요로 한다면 정착제에 염화암모늄50g/1을 가하면 1/2-1/3의 시간에 끝난다.

정착액의 일례

A액 :물 600㎖

티오황산나트륨 300g

B액 :물 200㎖

무수 아황산나트륨 15g

빙초산 12㎖

나복스 12g

칼슘알룸 20g

A,B 두 용액을 다른용기에 용해한다.A액을 교반 하면서 천천히 B액을 가한다. 물을 물을 가해서 전량을 1L로 한다. 인화지용정착액으로는 상기 처방으로부터 경막제의 알룸을 제거해도 좋지만,

여름에만 5g/1를 넣는 편이 안전하다.이외에 여러 가지 종류의 조합제 (Fuji Fix, Fuji super Fix)가 시판 되고 있다.

Ⅲ전자현미경 슬라니드 제작법

A. 직접법 (전현 네가필름으로부터 직접 반전하는 방법)

장점: 간편하고 조속히 제작 가능

1. 노출, 현상:

1) 암실내에서 네가필름을 인신기 (확대기)에 걸치고, 전현슬라이드용 마운트의 외면적 (40X40mm)에 맞추어서 축소상이 나오도록 조절한다.(extention tube사용)

2) 미사용 전현 필름을 4분절하녀 감광막면위 (암실 적색등 아래서 회백색을 나타낸다.)에서 단시간 노출(1-2초정도, 포커스에 주의한다.)

3) 노출면을 아래로하여 현생액증에 투입하여 현상한다.

현상액 : 코렉톨 인화지용 현상액을 다시 물에 2뱁 희석한 것.(희석도를 바꿈에 따라서 슬라이드의 연경조도를 바꿀 수 있다)

비노출면에 상이 살짝 나타난 시점에서 조속히 정지액증에 옮긴다.( 현상시간 1분이내, 단시간에 검게된때에는 노출과다이므로 안된다.)

2. 정지 : 정지액 (1.5%초산수용액)중에 1분 이상.

3. 정착 : 정착액에 30초 이상

정착처리에 의해 미노출부 감광막이 소실되고, 필름에 투명감이 생긴다. (이때 느리게 정착액을 교반하여 슬라이드 필름 여러개가 밀착하여 정착부족에 빠지는 것을 방지한다. 상처 내지않도록 주의)

4. 수세 : 흐르는 물에 1시간 이상

5. 건조 : 드라이 웨액에 담근 후, 집게로 찝어서 건조시킨다.

6. 적절한 크기로 트리밍하여 상술 전현 슬라이드 마운트 내에서 마운트한다.

B. 간접법 (확대한 사진에서 복사, 반전하는 방법)

장점 : 화면내에 지시기호나 배율 스케일 등을 기입하는 것이 가능.

1. 전현 네가 필름으로 6절대사진을 만들고, 켄트지 등의 대지에 붙인다.

2. 필요에 따라서 인스턴트 레터링 등을 사용해서 화ꅱ내에 지시기호등을 넣는다.

(핵:N,분비과립Sg등)

3. 초미립자필름 (네오판 F)등에 복사 (35mm, 브로니판)하여 네가필름을 얻는다.

4. 미사용 전현 필름에 반전하여 전현슬라이드를 만든다.(이하 직접법에 준한다.)

3.초박절(Ultra-thin sectioning)

. 초박절 하기전에 블록표면을 적당히 자른다. 적당히 자르는 것은 초박절에 이용하는 글라스나이프의 일단에서 행한다. 이때에 광학현미경용 절편을 잘라 그 절편을 톨루아딘블루 등으로 염색하여 현미격하에서 목적하는 장소를 정하고 박절에 들어간다.

초박절편은 (Uitra-microtome)을 사용하여 얻게 되지만, 두꺼운 절편은 전자선이 통과하기 어려우므로 될 수 있는데로 얇게 만들지 않으면 안된다. 우선 나이프를 uitramicrotome에 set하고, 증류수를 넣고 거기에 박절한 절편을 띄운다. 두께의 판정은, 보-트내에 떠있는 절편은 빛의 간섭현상에 의하여 착색되어 보이므로 그착색의 정도에 따라서 판정한다.

절편의 색조와 두께의 관계

은회색


-60mu




60-90mu

사용가능



90-150mu

사용가능



150-190mu

사용불가



190-240mu

사용불가



240-280mu

사용불가



280-320mu

사용불가











8. 만들어진 칼을 40- 60배 정도의 실체 혹은 광학 현미경 저배율하에서 광선을 잘 가감하면서 정밀조사하고, 작은 "톱날"이 있는지 없는지를 보고 , 좋은 칼을 선택한다. 불량한 곳을 표시해서 사용하는 사람도 있다.

9. 좋은 칼을 선택하면, 초마이크로톰에 맞는 크기에 칼의 형태를 준비한다. 글라스 절단기로 자르고나서 글라스 ꥅ치로 자르면 칼리 완성된다. (LKB의 나이프메이커는 여기까지 기계조작이 가능하다.三()의 나이프메이커로는 이부분은 각자가 행한다.)

10. 칼의 형태가 잘된 좋은 글라스 나이프가 만들어지면 비닐테이프 등으로 칼날에 보트를 단다.