Ⅳ. 시료 지지막의 제작법

포매수지는 일반적으로 전자선에 조사에의하므로, 그 절편은 지지막 위에 올려서 전자현미경으로 검경한다. 게다가 수지의 승화를 방지하기위하여 절편의 중위에 카본증착을 하는 경우도 있다. 그러나 전자선조사에 강한 에폭시수지등의 절편은 지지막이 없어도 충분히 검경 할 수 있으므로 이러한 경우 에는 집착처리 한 sheet mesh(세말한철망)에 직접 올려서 검경한다.

1. 메시(mesh)

·통상, 구리의 얇은 판에 구멍이 나있는 판성의 mesh가 사용된다. 이것들의 직경은 전나현미경의 시료 직통에 맞도록3mm로 통일되어있다.

·재질은 구리외에도 니켈 맥금 스테인레스 몰리브덴등이있다.size는 75-1,000 mesh의사이의 각 단계의 것들이다.

·구멍의 모양은 원,사각,직사각형, 6각등이있다. 기타0.1-0.6mm의직경의구멍이1개있는단공 mesh나 정방향의 구멍이몇게늘어서있는slitmesh도

시판되고 있다.

·세계적으로는 spec imen grid혹은 specimenscreen이라고 불리고 있다.

2. 시료 지지막

시료 지지막으로서는 다음의 특성을 가질 것을 요구된다.

1) 수백 옹스트롱(Å)이하의 균일한 두께 박막으로 되어 있을 것.

2) 전자선에 대하여 강인할 것

3) 표면이 무구조일 것

4) 시료를 지지하기 쉬운 표면을 가질 것

5)제작이 용이할 것

·일반적으로 사용되고있는 지지막은 콜로디온(collodion), 포름발(폴리비닐포말), 카본등의 박막이 있다. 또한 지지막을 보강할 목적으로 콜로디온, 포름발의 지지막위에 얇게 진공 증착한 것도 사용한다.

A. 콜로디온 지지막(von Ardenne, '42)

·피막형성능이 좋고, 지지막으로서 가장 오랜 역사를 갖고 있고, 현재도 널리 사용되고 있다.

(작제법)

. 삼발이 위에 얹은 글라스 샤레(직경 15㎝이상), 또는 뷰나로트에 절반 정도 증류수를 넣고 글라스 등에 붙여 놓은 mesh를 수증에 넣고, 바닥에서 1㎝높이의 대위에 놓고 버너로 증류수의 온도가 35-50℃될때까지 가열하여,1.0-2.0%콜로디온 초산아밀 용액을 피펫에 넣어, 수면 중앙에 한방울 떨어뜨린다. 액은 빠르게 퍼지고, 용매가 휘발한 후에 막이 생긴다. 사이폰 등을 이용하여 물을 빼내서, 수면을 낮춤으로써 sheet mesh에 부착시칸다. 물을 전부 유출 시킨후. 대를 그대로 건조하여 보존한다.

·그외에 슬라이드 위에 콜로디온 박막을 펴서 행하는 건식법이 있다. 아주 청결한 슬라이드글라스를 수평으로 유지하고 그위에다 콜로디온 용액(0.3-0.7%)를 소량 흐르게하여 퍼뜨린다. 빨리 슬라이드글라스를 수직으로 바꾸어 놓는다. 조금지나서 밑에 고인 과잉액을 여지로 빨아내어, 다시 수평으로 원위치 시키고 용매를 휘발 시켜, 슬라이드글라스 가장자리부터 기울여서 증류수에 담그어 가면 콜로디온막은 글라스의 면에서 떨어져서 수면에 부유한다. 이 막위에 sheet mesh를 슬라이드글라스가 덮어 씌우듯이 올려서 늘어놓는다.sheet mesh가 올려져 있는 박막 한쪽끝에 위에서부터 슬라이드글라스를 붙여서 수직으로 수중에 넣으면, 슬라이드글라스 위에 콜로디온 박막에 덮어진 sheet mesh가 부착한다. 수중에서 슬라이드글라스위에 sheet mesh가 있도록 방향을 바꾸어서 수중으로부터 꺼내어 여분으로 붙어있는 물을 여지에 흡착시켜 건조 보존한다.

B. 포름발 지지막 (폴리비닐 포말, Schaefer and Harker ; '94)

. 기계적강도 내구성이뛰어나다.

. 건식법으로 제작하지만 0.1-0.5%(중량)의 염화에틸렌 또는 클로로포롬 용액으로 하여

콜로디온 막의 경우와 똑같이 행한다.

C. 카본지지막

. sheet mesh에 콜로디언 또는 포름발 지지막을 붙이고, 그것들의 막 위에 진공으로 카본증착을

행한후 용매로 콜로디온 또는 포름발을 용해한다.

3. 마이크로 mesh

. 여러 가지 지지막은 콘트라스트 및 해상도를 저하시키기 때문에 지지막이

없는 것이 좋다.Epoxy수지에 포매된절편은 직접 마이크로 mesh ,

sheet mesh 에 올려놓고 관찰하는 일이 있다.

A. 아미크로 mesh는 마이크로리드 라고도 불리우며 전현의 조정(비점수차의 보정)에

흔히 사용된다.미생물 시료 등과 같이 약 40,000배 이상에서 관차하는 시료의 지지망 으로써

없어서는 안되는 mesh이다.

(조작법)

1) 큰 샤레에 증류수를 넣고, 작은 샤레에 아세톤을 넣어 놓는다.

큰 샤레에 금속대를 넣고 그위에 슬라이드글라스를 놓는다.

2) mesh를 1매씩 핀셋으로 집어서 아세톤에 세정한후에 슬라이드글라스에 늘어놓는다.

3) 얼음 조각을 넣어서(4℃)2-3분후에 콜로디온 2% 또는포름발 염화 에틸렌 용액을 1-2방을 떨어뜨린다. 주위에 주름이생겨서 중앙부근이 완전히 막을 형성하기 전에 입으로 분다.이때 될수 있는한 입을 가까이 대고 약하게 부는 듯 하게 하면 균일하게 구멍이 생긴다.

4) 2-3분 후에 막이 완전히 형성된다.그것을 확인후 금속대를 들어올려서mesh에 막을 접착한다.

5) 금속대체 부란기안에서 (40-45 ℃)건조

6) 건조후 막이 직접 불에 닿는 듯이 하여 알콜램프로 굽는다.

7)카본보강

B. mesh와 지지막 또는 시료와 접착법

. 염색 및 수세 중의 절편의 떨어짐, 지지막과 절편의 떨어짐 등을 방지하기 위하여 다음의 처리를 행한다. sheet mesh의 표면에 접착성을 처리하는데는 클로로프렌라바(Noeplene W) 0.2-0.5%톨루엔 용액을 만들어, 완전히 세정한 슬라이드 글라스 위에 나열한sheet mesh위에 피펫으로 적하한다. 용제가 휘발한후 mesh의 표면은 접작제층으로 덮여진다.