V 블록의 절삭 (Triming), 글라스나이프의 제조법 및 초박절법

1. 블록의 트리밍

초박절에 앞서서, 블록에 적당한 트리밍을 가해서 시료를 초박절편 할 면을 노출 시킬 필요가있다. 트리밍 할 때 에는 포매의정도 경도 등에 따라서 절삭의 각도를 변화시킨다. 블록의 상태에 응해서트리밍을 하는 것이 좋다. 트리밍에는 안전면도날 (양면,편도) 사용법을 알면 좋다. 박절면의 면적은 얇은 절편을 희망할수록 정도로 작게하지않으면 않되지만 통상 0.5-1.0㎣정도로 하는것이좋다. 박절면의 형태는 가능하면 정방향에 가까운 편이 좋다.

2. 글라스나이프제작법

트리밍한 블록은 글라스나이프를 사용해서 초박절하지만 나이프가 나쁘면 나이프자국이, 흔들림 등의 원인이 되는 일이 많으므로 될 수 있는대로 좋은 나이프를 만들도록 주의한다.

1. 다이아몬드로 그은선이 있는쪽을 위면으로 하여 절단선밑에, 성냥개비,가는철봉 등의 꺽쇠를 넣고, 좌우 같은힘으로 위에서부터 눌러가면 절단선이생기고, 장방향의 글라스판(8-4cm)이 2매가된다. 이때 새로 갈라진면은 한점흠도없는 mirror-surface가 된다. 꺽쇠를 넣어서 손가락으로 눌러 쪼개거나 가장자리가 약간 꾸부러진 글라스 ꥅ치의 중심선에 맞추어 조용히 힘을주어 갈라도 좋다.

2. 책상 가장자리에 가득 글라스를 놓고 손가락은 될수있는한 글라스판의 양하단을 같은 힘으로 눌러서 전단부의 글라스연이 올라올정도로 누르면 .바르게 똑바로 쪼개진다. 만약 도중에서 좌측이나 우측에 할선이 굽어질때응 대부분 누르는 방법의 불균형, 최초의 절단선을 넣는법이 나빴기 때문이다. 이때 사용하는 글라스판은 미리세제로 충분히 씻고, 오염물을 세척하여 놓을 것, 또, 손가락도 청결히해둔다. 상처 등이 없도록충분히 주의하여 취급할 것, 현재에는 다이아몬드 나이프도 사용되게되었다.

3. 다음에 남은 8cm 변의 중앙에 같은 방법으로 틈을 넣어서, 다시한번 mirror-surface를 갖는다.

한변이 4㎝의 정방향을 4개 얻을 수 있다.

4. 하방의 직선사에 mirror-surface를 위의 좌우에 가도록 놓고, 자를 붙이고, 잘 목측하여 글라스 절단기로 대각선을 따라 약간만 좌 또는 우(어느쪽인가 칼날을 만들 때 정한다.)로 기울여서 정점에서 0.5㎝아래로부터 금을낸다.

5. 이것을 이미 서술한 것과 똑같이 하여 글라스에 절단선을 넣어 간다. 두드려서 쪼개버리지 않도록 주의한다. 절단선은 다이아몬드로 만든 자국의 상단부터 조금 나간 곳에서 멈추어서, 꺽쇠를 아래로 넣고 글라스 ꥅ치로 쪼갠다. 혹은 백열한 글라스 봉을 자국 위에누르는 등 하여 열로 쪼개면 좋다. 이렇게 하여 한변 8㎝의 글라스판에서 4개의 글라스 나이프가 이상적으로는 얻게 된다. 그러나 처음동안에는 생각처럼되지않는다. 만들어진 칼날을 다음과 같이해서 조사하고 좋은 칼날을 사용하고 그외에 는 버린다.

7. 이것들의 쪼개는 법으로 좋은 칼날을 얻는 가장 중요한 조건은 한변 4cm의 판글라스로부터 칼을 만들었을 때 칼이 되지 않고 버리는 편의 삼각편의 칼과 대각에 있는 귀퉁이늬 자른 나머지가 귀퉁이에서 1mm 이내에 들어갈 때에는 거의 만점에 가까운 칼날을 얻고, 위부분의 쪼개고 남은 곳이 많을 때 (2-3mm)는 그 경우에 있어서는 불량한 칼이 된다.

8. 만들어진 칼을 40-60배 정도의 실체 혹은 광학현미경 저배율하에서 광선을 잘 가감하면서 정밀조사하고, 작은 "톱날"이 있는지 없는지를 보고, 좋은 칼을 선택한다. 불량한 곳에 표시를 해서 사용하는 사람도 있다.

9. 좋은 칼을 선택하면, 각각의 초마이크로톰에 맞는 크기에 칼의 형태를 준비한다. 글라스 절단기로 자르고 나서 글라스뺀치로 나르면 칼이 완성한다. (LKB의 나이프메이커는 여기까지 기계의 조작으로 가능하다. 三慶의 나이프메이커로는 이부분은 각자가 행한다.)

10. 칼 형태가 잘된 좋은 글라스나이프가 만들어지면 비닐테이프 등으로 칼날에 보트를 단다.

3. 초박절 (Ultra-thin sectioning)

· 초박절 하기전에 블록 표면을 적당히 자른다. 적당히 자르는 것은 초박절에 이용하는 글라스타이프의 일단에서 행한다. 이때에 광학현미경용 절편을 잘라 그 절편을 톨루이딘블루 등으로 염색하여 현미경하에서 목적하는 장소를 정하고 박절에 들어간다.

·초박절편은 Ultra-microtome을 사용하여 얻게되지만, 두꺼운 절편은 전자선이 통과 하기 어려우므로 될 수 있는대로 얇게 만들지 않으면 안된다. 우선 나이프를 ultramicrotome에 set하고, 증류수를 넣고 거기에 박절한 절편을 띄운다. 두께의 판정은, 보-트내에 떠있는 절편은 빛의 간섭현상에 의하여 착색되어 보이므로 그 착색의 정도에 따라서 판정한다.

· 절편의 색조와 두께의 관계

은회색 -60mu

은 60-90mu 사용가능

금 90-150mu 사용가능

자 150-190mu 사용불가

청 190-240mu 사용불가

녹 240-280mu 사용불가

황 280-320mu 사용불가