1. 시판용 M. pulmonis-rodent coronavirus-sendai virus antibody test kit를 이용하여 혈청검사를 한다. 시험방법은 하기와 같다.


 ① MHV 감염여부를 확인하고자 검사대상동물을 선정하여 채혈하고, 이것을 실온에 방치하여 혈청을 채취한다.

 ② Positive and negative control serum과 시험 혈청에 항원이 묻어있는 Murine ImmunocombTM (Charles River, U.S.A)을 deeping 하여 30분간 실온에서 반응시킨다.

 ③ Tap water에 washing 후, enzyme-conjugated anti-mouse and anti-rat IgG에 30분간 실온에서 반응시킨다.

 ④ Tap water로 washing 후, chromogenic enzyme substrate에 5-20분간 반응시킨다.

 ⑤ 발색시약(OPD)의 발색정도에 따라 MHV 감염여부를 확인한다.


2. MHV항원이 흡착되어 있는 시판용 plate를 이용하여 혈청검사를 한다. 시험방법은 하기와 같다.

 ① MHV 감염여부를 진단하고자 검사대상동물을 선정하여 채혈하고, 이것을 실온에 방치하여 혈청을 채취한다.

 ② deep freezer에 보관되어 있는 ELISA plate를 실온에서 20분간 건조시킨다.

 ③ 채취한 혈청을 PBS에 1:5로 희석하고 이를 다시 5% skim milk에 1:12로 희석한다.

 ④ 한 샘플당 희석한 혈청을 건조시킨 ELISA plate의 tissue control well과 antigen coated well에 50ul씩 각각 분주하고 37℃에서 40분간 반응시킨다. (양성혈청과 음성혈청을 같이 수행한다)

 ⑤ 반응시킨 혈청을 ELISA plate에서 털어버리고 0.05% tween PBS 360ul를 각 well에 분주하여 5회에 세정한다.

 ⑥ 2차항체(peroxidase-conjugated anti-mouse IgG, peroxidase-conjugated anti-rat IgG)를 PBS에 1:5,000으로 희석한 후 ELISA plate의 각 well에 분주하고 37℃에서 40분간 반응시킨다.

 ⑦ 반응시킨 2차항체를 ELISA plate에서 털어버리고 0.05% tween PBS 360ul를 각 well에 분주하여 5회에 세정한다.

 ⑦ 발색시약(OPD)을 ELISA plate의 각 well에 분주하고 450nm의 파장에서 발색정도를 읽는다.

 ⑧ 결과는 net score 0-1: negative, net score 2: borderline, net score 3, >3: positive으로 해석한다. (net score=antigen coated/0.13 - tissue control/0.13)