마우스와 랫드를 경추 탈구로 치사시킨 후, 기관에서 폐까지 멸균 PBS로 flushing하여 supplement(yeast extract 0.01g, horse serum 20ml, penicillin 55,000unit, thallium acetate 50mg in DW 30ml)를 3 : 7로 첨가한 PPLO 평판배지에 도말하여 혐기성 상태로 37℃에서 3일간 배양한다. 3일간 배양한 후 형성된 세균의 집락은 Dienes염색과 PCR (Polymerase Chain Reaction)을 통하여 M. pulmonis임을 확인하고 계대한다.