Dienes염색은 PPLO 평판배지에서 발육한 집락을 포함하는 agar block(1Cm3)을 slide glass 위에 올려놓고 Dienes 염색액을 1방울 적하하고 5분간 방치한 후 cover glass를 올려놓고 40×로 관찰한다. 관찰결과 푸르게 염색되고 집락의 형태가 유지되는 것을 마이코플라스마의 집락으로 판정한다. Dienses 염색액의 조성은 Methylene blue 2.5g, azure Ⅱ 1.25g, maltos 10g, sodium carbonate 0.25g, benzoic acid 0.2g, methiolate 0.01g을 증류수 100ml에 용해하여 stock solution을 조제하고 working solution은 증류수를 이용하여 3%로 조제한다.