먼저 96 well ELISA plates에 M. pulmonis(R-2)에서 추출한 LAMP (1.25 ug/ul)를 각각 세로줄로 well 당 6.25 ug부터 2배수로 계속 희석하였다. 이를 4℃ 냉장 상태에서 overnight 흡착 반응을 하였다. PBS로 5분간 3회 ELISA shaker에 흔들어 주면서 washing 하였다. 1% bovine serum albumin in PBS (Sigma, USA)를 100 ul 씩 각 well에 분주하여 blocking 하였다. 이후 마. 에서 얻어진 양성 혈청을 각각 가로줄로 1:20부터 2배수로 serial 희석하여 각 well에 100 ul 씩 분주하여 실온에서 2-4 시간 동안 반응하였다. 0.05% tween-PBS (T-PBS)를 이용하여 동일한 방법으로 5분간 3회 washing 하였고, goat anti-rat IgG (Zymed, USA)를 1:5,000으로 희석한 2차 항체를 100 ul 씩 각 well에 분주하여 실온에서 2 시간 반응하였다. T-PBS를 이용하여 5분간 5회 washing 하였고 o-Phenylenediamine (Sigma, USA)으로 발색한 후, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.