1. 방법

 (1) 바이러스 분리 대상 동물의 선정

일반사육시설에서 사육 중인 마우스와 랫드에서 심장 채혈을 통해 혈액을 채취한 후, 혈청에 대하여 위의 방법과 동일하게 SeV 감염을 ELISA 법으로 진단한다. ELISA에서 SeV 감염 양성으로 판정된 개체가 포함된 집단의 2~4주령 동물을 바이러스 분리 대상 동물로 선정한다.


 (2) 바이러스 분리 시료의 처리

  마우스와 랫드를 안락사 시킨 후, 폐를 무균적으로 적출한 후 멸균 PBS에 10배 (v/w)희석하여 분쇄한다. 3000g에서 30분간 원심분리하고 상층을 수거하여, 0.2 um filter를 이용하여 여과시킨다. 여과된 용액 200ul를 SPF 수정란의 장뇨막강내에 접종하여, 3일간 배양한 후 증폭된 바이러스 액을 수거한다.


(3) 바이러스의 증폭배양

SPF란을 이용하여 (2절 참조) 바이러스를 증식배양한 후 바이러스가 증식한 장뇨막강액 3000g에서 30분간 원심분리하여 바이러스를 1차 정제한다.


(4) 초원심분리 및 SeV 확인

1차정제된 상층액 5ml 을 취하여, 60 % (w/v) sucrose 2.5ml 위에 30% (w/v) sucrose 3.5ml 을 중층시킨 원심 tube 위에 조용히 중층시키고 5'C에서 90분간 100,000g로 초원심분리하여 (Beckmann SW-28 rotor), 60%와 30%의 sucrose층 사이에 보이는 Sendai virus를 회수한다. 이렇게 일차 정제한 SeV를 Phosphate buffered saline(PBS)로 5ml이 되게 희석하여 NVT-90 rotor를 이용하여 90분간 100,000g에서 초원심 분리하여 바닥에 침전시킨다. 상층액을 버리고 침전된 바이러스를 멸균 PBS 500ul에 희석하여 수거한다.


(5) 항원은 HA titer 및 protein농도를 확인한 후 실험에 사용하기전까지 -70'C deep freezer에 보관한다.